Western Blot的前世今生--也许是时候说再见了。

万恶之源western，一个又臭又长的实验，如果不裁膜的话一个完整的实验周期要三天之久，影响实验结果的因素也多，关键的是三天之后你还很大概率不能拿到理想的实验结果，那就又是三天

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同时以大多数期刊的要求来说，WB结果是最好伪造的数据，那么一项划时代的精确蛋白水平测量手段应该迫在眉睫了[doge]

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但是你蛋白质预测的再牛，最终还是要回归到wb实验的验证上[笑哭]你做不出来最终还是投不出去

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其实不是western blot是重灾区 ，而是所有生物实验都是造假重灾区，只不过是western blot最容易被发现造假ps等，其他的大多数生物实验比如说免疫荧光，切片染色等都能通过调整分组或者挑图片视野来造假符合预期，统计图更是可以随便编数字，除了做实验的本人知道哪个图片是哪个组的，其他人连上帝都不知道。但是western blot由于是好多个组在一个膜上，做实验过程中稍有不慎就出问题，就算出结果了万一有一个组不符合趋势那就要从头开始，非常耗时耗力，所以很多人做western blot 就不得不造了，但是western blot造假也不容易，ps也是看技术的，所以才那么多western blot造假被发现的例子。其他实验被发现造假大概率都是图片重复，区域重叠[笑哭][笑哭][笑哭]

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我是觉得western blot特异性和灵敏度都太低了，一个哪怕是实验技术很熟练了，还是需要很好的抗体做支撑，而抗体的试错成本真的很高，需要耗费大量时间和经费来挨个排除。另外一个是我觉得真的需要蛋白调控很明显的时候wb才能测定出稳定趋势，特别是敲低、敲除和过表达这种，wb验证很明显，但是如果只是药物调控那种，其实很多时候趋势非常不稳定。

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所以为什么没有Eastern blot（不是）

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哥们，我对于你这个视频讲的内容是个外行。我提一个建议。你在视频开头引子讲了一大串内容却没有讲WB是个什么东西，不要说一句话的简介，甚至连个中文名也没有，不了解生命科学的观众完全不知道WB是个什么，必须看完视频才能知道，观众很容易看个开头的引子就放弃，建议下回在视频开头至少加上中文名

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直接在图上PS加复制粘贴的造假已经过时了，如果要“认真”的造假，直接找一个大小差不多的蛋白（根据你文章结论需要的量来加），用相应的抗体来跑；同理，PCR（包括qPCR）也是一样。这样做来应付pubpeer这种级别的审核几乎是无解的。

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但是还是替代不掉，我忍这个实验已经很久了，然后老板让我看了篇顶刊，说纯砸钱就行，结果打开一看，发现这篇文章前面确实砸钱弄出来整整齐齐七张图，结果后面返修补了一大堆图全是wb[跪了][跪了][跪了]

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WB实验步骤：做胶～等凝固～做浓缩胶～蛋白变性～上样～电泳～转膜～孵育一抗～洗脱～孵育二抗～洗脱～显色～没有得到条带～哭[大哭][大哭][大哭]

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别说造假了，同一批样认真做两次趋势都不一定一样

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看视频的时候就在等我的WB[笑哭]

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新人报道，感谢大家支持！会努力持续更新，如果有想听的题目也欢迎留言[星星眼]

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WB是一个必须且急需淘汰的实验方法，步骤太多，而且每一步都会影响最终成像

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可惜现在大部分期刊 除了顶级 依然认为WB是金标准 顶级的才会建议补其他

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按这套逻辑，发明琼脂糖凝胶电泳的那篇文章引用数应该大于WB才对[吃瓜][吃瓜][吃瓜]，类似的研究方式论文还有一大堆，标题有点哗众取宠了[吃瓜][吃瓜]

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wb主要是太好造假了[doge_金箍]，想要什么结果就能出什么结果

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[tv_思考]

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你知道最可气的是什么吗，学医的，学中医的 都要去做这些生物实验，有时候我真的很恍惚，我当年报考的临床医学，怎么最后读了个博，给我读到了生物实验室天天跑蛋白，跑PCR，做生物实验上了[大哭][大哭][大哭]

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说的很好，但是后面那些基本只有好大学好机构才能做，多组学测序、类器官需要花多少钱呢又，经费就这些，谁不知道那些有价值，可是又有多少人能做呢。[大哭]，可能是说给top听的吧，我如果不把条带跑齐，不在WB上卷出东西，那我又有什么资格去做那些实验呢。

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